CRISPR Indel
产品名称： CRISPR Indel
英文名称： CRISPR Indel
产品编号： IC1
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更新时间： 2025-08-15T14:35:05
使用范围： null
启东芳景生物科技有限公司
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CRISPR Indel
通过CRISPR非同源修复产生基因组序列的Indel（small insertion and deletion，即少量碱基的插入和缺失），实现了基因编码区域的移码突变，从而造成基因功能的破坏。
技术优势：
◉适用性广泛：小范围基因编辑，避免敲除对附近相关基因造成影响
◉敲除效率高：针对较难敲除的基因或基因组区域有更好的效果
局限性与解决方案：
◉局限性：可能产生新的未知功能蛋白，对基因功能研究造成表型干扰
◉解决方案：芳景生物可根据客户需求，获取多个移码突变基因型，以减少可能得新蛋白对研究的干扰。
| CRISPR indel(one target) | ||
| 实验步骤 | 内容 | 周期(周) |
| Target测序 | 1.方法：PCR测序 2.目的：确定注射果蝇品系的靶序列，确保gRNA序列正确并进行有效切割 |
1 |
| gRNA和cas9-mRNA合成制备 | 1.gRNA设计：一个靶位点设计两个gRNA 2.gRNA合成：T7体外转录合成 3.cas9-mRNA合成：优化的cas9-DNA质粒为模板，体外转录合成cas9-mRNA |
2 |
| 显微注射 | 1.注射品系：w1118(或客户指定品系) 2.注射样品：gRNA+cas9-mRNA 3.注射胚胎数量：300-400个 |
2 |
| 杂交鉴定和构建稳定品系 | 1.P0果蝇与平衡子杂交，并进行indel测序鉴定 2.阳性P0的子代F1果蝇与平衡子杂交，并进行indel测序鉴定 3.阳性F1的子代F2果蝇与平衡子杂交，并进行indel测序鉴定 4.阳性F2的子代F3果蝇自交构建稳定品系 5.F3的子代F4果蝇自交构建纯合品系，并进行indel测序鉴定 |
8~10 |
| 合计 | 13~15 |