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 GAL4-UAS转基因果蝇

GAL4-UAS转基因果蝇

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产品名称: GAL4-UAS转基因果蝇

英文名称: GAL4-UAS

产品编号: ID2

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更新时间: 2025-08-15T14:23:06

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GAL4-UAS转基因

 利用attP-PhiC31转基因技术,把外源物种目标基因转入黑腹果蝇基因组,通过GAL4-UAS二元调控系统,让基因在果蝇体内高量表达并进行表型研究。这样,即可利用黑腹果蝇的科研优势,将非模式物种基因功能研究简单化、成熟化和标准化。

全身温控过表达解决方案

◉技术难题:当GAL4由全身表达的强启动子驱动时,UAS下游的外源基因会在黑腹果蝇绝大部分细胞过量表达,进而可能产生毒性,导致果蝇生存能力下降甚至死亡。

◉解决方案:芳景生物制作并提供了Tubp-GAL4,Tubp-GAL80ts果蝇品系,通过饲养温度变化控制外源基因表达量,保证在低温时,转基因果蝇可以顺利生存和扩增,同时也保证高温热激之后,目的外源基因进行过量表达。

UAS;GAL4-OR—昆虫气味受体与嗅觉研究

UAS;GAL4-OR系统的GAL4-OR驱动品系中,在嗅觉感受器神经元特异性表达的果蝇内源OR基因被敲除并替换成GAL4,使得该神经元失去相应OR基因功能(空神经元);将昆虫的外源OR基因转入黑腹果蝇基因组制作成UAS-OR品系,用GAL4-OR品系驱动后,外源OR基因将获得与果蝇内源OR基因相同的表达模式,实现在该空神经元中特异性表达。

其他GAL4-UAS品系构建:

除Tubp-GAL4,Tubp-GAL80ts品系外,芳景生物还可提供多种GAL4驱动品系,并负责与UAS转基因品系构建成稳定遗传品系,实现外源基因在果蝇中的时空特异性稳定表达。

attP-PhiC31定点插入(GAL4-UAS过表达果蝇品系构建)    
实验步骤 内容 周期(周)
注射样品制备 1.Donor载体构建:无缝克隆连接
载体:包含attB位点 + UAS + miniWhite marker
片段:包括质粒亚克隆,cDNA克隆,基因合成等方式
2.Donor质粒去内毒素提取
1~4
显微注射 1.注射品系:attP果蝇品系(PhiC31内源表达)
2号染色体:attP40、attP5
3号染色体:attP2、VK00005
2.注射样品:donor质粒
3.注射胚胎数量:200-300个
2
杂交和筛选 1.P0果蝇与平衡子杂交
2.筛选F1阳性果蝇(红眼)
2
分子鉴定 1.插入目的序列鉴定
2.插入基因组位置鉴定
0
构建UAS和UAS+GAL4稳定遗传品系 1.F1阳性果蝇杂交双染色体平衡子
2.构建UAS稳定/纯合品系
3.F2果蝇与GAL4驱动品系杂交
【1】
4.构建2,3号染色体双平衡的UAS+GAL4稳定/纯合品系
【2】
8~10
合计   13~18

 

attP-PhiC31定点插入(GAL4-UAS全身温控过表达果蝇品系构建)    
实验步骤 内容 周期(周)
注射样品制备 1.Donor载体构建:无缝克隆连接
载体:包含attB位点 + UAS + miniWhite marker
片段:包括质粒亚克隆,cDNA克隆,基因合成等方式
2.Donor质粒去内毒素提取
1~4
显微注射 1.注射品系:attP40或attP5果蝇品系(PhiC31内源表达)
2.注射样品:donor质粒
3.注射胚胎数量:200-300个
2
杂交和筛选 1.P0果蝇与平衡子杂交
2.筛选F1阳性果蝇(红眼)
2
分子鉴定 1.插入目的序列鉴定
2.插入基因组位置鉴定
0
构建UAS和UAS+GAL4稳定遗传品系 1.F1阳性果蝇杂交双染色体平衡子
2.构建UAS稳定/纯合品系
3.F2果蝇与Sp/CyO;Tubp-GAL4,Tubp-GAL80ts驱动品系杂交
4.构建2,3号染色体双平衡的UAS;GAL4,GAL80ts稳定/纯合品系
【1】
8~10
合计   13~18

 

attP-PhiC31定点插入(GAL4-RNAi基因敲低果蝇品系构建)    
实验步骤 内容 周期(周)
注射样品制备 1.Donor载体构建:无缝克隆连接
载体:包含attB位点 + UAS + miniWhite marker
片段:21bp shRNA反向互补长片段
【1】
2.Donor质粒去内毒素提取
1~4
显微注射 1.注射品系:attP果蝇品系(PhiC31内源表达)
2号染色体:attP40、attP5
3号染色体:attP2、VK00005
2.注射样品:donor质粒
3.注射胚胎数量:200-300个
2
杂交和筛选 1.P0果蝇与平衡子杂交
2.筛选F1阳性果蝇(红眼)
2
分子鉴定 1.插入目的序列鉴定
2.插入基因组位置鉴定
0
构建UAS和UAS+GAL4稳定遗传品系 1.F1阳性果蝇杂交双染色体平衡子
2.构建UAS稳定/纯合品系
3.F2果蝇与GAL4驱动品系杂交
【2】
4.构建2,3号染色体双平衡的UAS+GAL4稳定/纯合品系
【3】
8~10
合计   13~18