CRISPR KI(Point Mutation)
产品名称： CRISPR KI(Point Mutation)
英文名称： CRISPR KI(Point Mutation)
产品编号： IC5
产品价格： 询价
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品牌商标： null
更新时间： 2025-08-15T13:51:13
使用范围： null
启东芳景生物科技有限公司
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CRISPR KI(Point Mutation)
在CRISPR和donor(同源臂arm+点突变序列PM)的共同作用下，实现对目标靶点进行切割的同时，通过HR(同源重组)修复，将基因组DNA序列精确替换，造成目的氨基酸点突变。
技术优势：
◉优化了donor质粒序列的设计，在目标氨基酸两侧引入若干同义突变，提高了基因编辑和分子鉴定的效率，且不会对基因的表达和功能产生额外影响。
◉针对其他物种基因点突变表型研究，可通过制作黑腹果蝇同源基因的同位点突变模型来进行功能验证。芳景生物免费提供黑腹果蝇同源基因及对应位点分析服务。客户只需提供物种、基因、目标氨基酸位点等信息，我们即可全流程制作并获得目标点突变果蝇模型品系。
| CRISPR KI(point mutation) | ||
| 实验步骤 | 内容 | 周期(周) |
| target测序 | 1.方法：PCR测序 2.目的：确定注射果蝇品系的靶序列，确保gRNA序列正确并进行有效切割 |
1 |
| gRNA和cas9-mRNA合成制备 | 1.gRNA设计：一个靶位点设计两个gRNA 2.gRNA合成：T7体外转录合成 3.cas9-mRNA合成：优化的cas9-DNA质粒为模板，体外转录合成cas9-mRNA |
0 |
| donor质粒载体构建 | 1.arm载体构建：无缝克隆连接 载体：Amp抗性常规载体 片段：注射果蝇基因组DNA中克隆5'+3'同源臂 2.Donor载体构建：无缝克隆连接 载体：arm载体PCR线性化，并引入目的点突变和gRNA识别位置点突变 3.Donor质粒去内毒素提取 |
3~4 |
| 显微注射 | 1.注射品系：w1118(或客户指定品系) 2.注射样品：gRNA+cas9-mRNA+donor 3.注射胚胎数量：400-500个 |
2 |
| 杂交鉴定和构建稳定品系 | 1.P0果蝇与平衡子杂交，并进行点突变和基因组插入位置PCR鉴定 2.阳性P0的子代F1果蝇与平衡子杂交，并进行点突变和基因组插入位置PCR和测序鉴定 3.阳性F1的子代F2果蝇与平衡子杂交，并进行点突变和基因组插入位置PCR鉴定 4.阳性F2的子代F3果蝇自交构建稳定品系 5.F3的子代F4果蝇自交构建纯合品系，并进行点突变测序鉴定 |
8~10 |
| 合计 | 13~16 |