大鼠血管生成素Ⅱ（Ang Ⅱ）检测试剂盒（ELISA）方法

使用说明书

仅供科研使用，不得用于医学诊断。

使用前仔细阅读本说明书。
用 途： 用于定量检测大鼠血清、血浆及相关液体样本中血管生成素Ⅱ（Ang Ⅱ）的含量。
工作原理
本试剂盒采用双位点夹心酶联免疫吸附法（ELISA），测定样品中大鼠血管生成素Ⅱ（Ang Ⅱ）的水平。向预先包被大鼠血管生成素Ⅱ（Ang Ⅱ）抗体的酶标孔中加入标准品、待测样本和HRP标记的血管生成素Ⅱ（Ang Ⅱ）抗体，经过温育和洗涤，去除未结合的组分，然后再加入底物A、B，产生蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅与样品中大鼠血管生成素Ⅱ（Ang Ⅱ）的浓度呈正相关。

需要而未提供的试剂和器材

1．37℃恒温箱。

2．标准规格酶标仪。

3．精密移液器及一次性吸头

4．蒸馏水，

5．一次性试管

6．吸水纸

注意事项
1．从2-8℃取出的试剂盒，在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差
3．建议所有标准品、样本都做双份检测。
4．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
5．为避免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和封板膜。
6．不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
7．底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。
操作步骤
1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为1800ng/L，1200ng/L ，600ng/L，300ng/L， 150ng/L）。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

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