MDCK细胞介绍与残留DNA质控

 MDCK细胞是1958年从Cocker Spaniel肾脏组织分离培育建立的细胞株。许多研究表明MDCK细胞系可广泛用于多种病毒的扩增和纯化，尤其是对流感病毒的感染效率高、增殖快，且流感病毒不易变异的优点，被公认为目前最适合流感疫苗生产的细胞系之一。 MDCK细胞作为宿主工程细胞，其宿主DNA残留将对机体产生安全性风险。尽管在MDCK细胞基质流感疫苗生产过程中已有残留DNA的去除工艺，包括采用超滤、核酸酶处理、层析、β-丙内酯灭活等方法，但疫苗产品中仍有可能残留宿主DNA及其片段。因此，为控制疫苗质量，需要对疫苗中MDCK宿主细胞残留DNA及其片段进行监测。

相关法规监管要求

WHO和美国FDA现行指导方针推荐成品中残留DNA不高于10 ng/剂，长度不大于200 bp；

美国FDA发布的指导原则中指出生物制品宿主细胞DNA残余限度为100 pg/剂，对于大剂量生物制品如单克隆抗体，根据其残留DNA来源及给药途径，DNA残留量可放宽至10 ng/剂；

欧洲药典通则规定的生物制品残留DNA限度大多为不超过10 ng/剂，但对个别疫苗的残留DNA限定标准更严格，如甲型肝炎灭活疫苗中的DNA残留量不得超过100 pg/剂，乙型肝炎疫苗中的DNA残留量不得超过10 pg/剂。

残留DNA检测

《中华人民共和国药典》2020年版第三部规定，外源性DNA残留检测采用DNA探针杂交法、荧光染料色法和定量PCR法。目前市场上对宿主细胞残留DNA检测，主要采用荧光探针qPCR方法，qPCR法具有极高的灵敏度、序列特异性和准确性，可为生物制药工业在工艺研究和成品质量控制方面提供可靠的检测手段，现也已成为各生物制品厂家首选检测方法。 为控制疫苗生产质量，需要对疫苗生产全过程进行安全性质量控制。翌圣生物从市场需求出发，自主研发了MDCK宿主细胞DNA残留（qPCR）检测试剂盒，以监测生物制品中MDCK宿主细胞残留DNA浓度。其能专一快速的检测抗体药、重组蛋白疫苗等生物制品研发和生产过程的中间品、半成品和成品中 DNA 残留量。还研发了与MDCK残留DNA检测试剂盒配套使用的宿主细胞残留 DNA 样本前处理试剂盒，以及配套的自动化核酸提取仪器。

产品特点

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灵敏度高：检测下限可低至0.5fg/μL；

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准确性高：DNA参考品与国家标准物质标曲基本无偏差，检测值CV＜5%；

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精密度高：重复性CV值＜10%，好于行业标准（15%），中间精密度＜15%；

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专属性强：不同细胞系间无交叉反应；

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定量准确：配套专属磁珠法样本前处理试剂盒；

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操作时间短：3小时内完成全部检测流程；

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稳定性好：多次反复冻融扩增效率仍较高，-20℃可储存2年；

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耐用性强：DNA碎片化程度不影响检测结果，碎片化DNA回收率高，适配多款qPCR仪器。

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产品流程

磁珠法样品前处理试剂盒

  可以手动提取，也可以与全自动核酸提取仪搭配使用。

  搭配翌圣磁珠法样本前处理试剂盒解放双手，自动化提取样本中的宿主细胞残留DNA。

MDCK宿主细胞DNA残留检测试剂盒

  对使用样本前处理试剂盒提取的样本中的残留DNA进行荧光探针q-PCR定量。试剂盒线性范围为：3fg/μL~300pg/μL，R2=1，扩增效率为99.29%，各浓度检测值CV<15%。

产品信息

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