本试剂盒仅供研究使用 标本：血清或血浆

　　一、注意事项

　　1. 此试剂为体外检测试剂，效期内使用，试剂应视为传染物，不同总批号的试剂不能混用。

　　使用前应将盒内各试剂取出。室温放置至少30分钟，

　　浓缩洗涤液出现结晶后，请于37℃孵育15分钟。

　　浓缩样品稀释液出现结晶后人ELISA试剂盒请于37℃孵育15分钟

　　若24小时内进行实验，标本可存放于2～8℃。不需及时实验，标本-20℃保存，避免反复冻融。

　　在反复清洗微孔板，并扣干微孔中的残余液体，否则将降低精确度，造成吸光度偏离的假像。

　　加样完毕后，应注意轻微摇动微孔反应条，以便使孔中的液体充分混匀。

　　试剂盒保存于2～8℃，请勿冷冻，有效期请见盒内标示。

　　二、实验前准备

　　1.使用前应将盒内各试剂取出，室温放置至少30分钟。

　　2.准备各种实验仪器及材料，如微量移液器，吸头，医用蒸馏水等

　　3.浓缩洗液与医用蒸馏水1︰19倍稀释后成为应用洗涤液

　　4.浓缩样品稀释液与医用蒸馏水1︰4倍稀释成应用样品稀释液

　　5.用应用样品稀释液来稀释样品，按照1：100的体积比来稀释样品如10μl的样品加入到1ml的应用样品稀释液中，充分混匀待用。)

　　三、操 作 步 骤

　　1.取出酶标板，设空白孔，依照次序对应分别加入100μl的标准品于空白微孔中(空白孔视为0号标准品，用医用蒸馏水替代)

　　2、分别标记样品编号，加入100μl的稀释样品于空白微孔中(不同的样本采用不同的吸头)。

　　3、将酶标板置于37℃温育30分钟;

　　4、将酶标板板取出，将其中的液体甩去，每个孔中全部加满应用洗涤液后，立即甩去液体;

　　5、每个孔中加满应用洗涤液后，轻微振摇酶标板30秒后将孔中的应用洗涤液甩去，在吸水纸上将酶标板拍干。

　　6、重复第5个步骤5次，在吸水纸上将酶标板拍干。

　　7、在标准品孔和样品孔中加入100μl的酶标偶合溶液。

　　8、将96孔板置于37℃温育30分钟。

　　9、将酶标板取出，将其中的液体甩去，每个孔中全部加满应用洗涤液后，立即甩去液体。

　　10、每个孔中再次加满洗涤应用液后，室温轻微振摇酶标板30秒后将孔中的应用洗涤液甩去，在吸水纸上将酶标板拍干。

　　11、重复第5个步骤5次，在吸水纸上将酶标板拍干。

　　12、在每个孔中加入底物A 50μl后立即加入底物B 50μl。轻轻振荡混匀。(A液、B液采用不同的吸头加样)

　　13、将酶标板置于37℃避光温育反应15分钟。

　　14、每个微孔中加入50μl的终止液，轻轻振荡混匀。

　　15、在酶标仪上，450nm处测定OD; 显色后，15分钟内进行测定。

　　16、根据制备的标准曲线人ELISA试剂盒计算样本含量

　　四、结 果 判 断

　　1. 仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值;

　　2、检测值范围：0-400pmol/L

　　3、敏感度：1.0pmol/L